Matthias Rath, Inc., Research and Development, Santa Clara, CA 95054 Schl\u00fcsselw\u00f6rter:\u00a0<\/em>antiproliferative und antimetastatische Wirkung, Brustkrebs (MDA-MB-231), Dickdarmkrebs (HCT116), Epigallocatechin-Gallat, Gelatinase-Zymographie, Matrix-Metalloproteinasen (MMP)-2 und -9, Ausbreitung von Krebs, Hautmelanom (A2058), spezifische Kombination aus Ascorbins\u00e4ure, Prolin und Lysin.<\/p>\n Wir haben festgestellt, dass eine bestimmte Kombination aus Ascorbins\u00e4ure (AA, 100\u00a0\u00b5M), Prolin (P, 140\u00a0\u00b5M) und Lysin (L, 400\u00a0\u00b5M) eine signifikante antiproliferative und antimetastatische Wirkung auf einige menschliche Krebszelllinien, Brustkrebs (MDA-MB-231), Dickdarmkrebs (HCT116) und Hautkrebs (Melanom, A2058) hatte. In Gegenwart dieser N\u00e4hrstoffkombination wurde die Invasion der extrazellul\u00e4ren Matrix durch menschliche Brustkrebszellen, Melanomzellen und Dickdarmkrebszellen um 50\u00a0%, 10\u00a0% bzw. 30\u00a0% gehemmt. Die Zugabe von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) verbesserte diese Ern\u00e4hrungssynergie weiter und f\u00fchrte zu einer noch deutlicheren hemmenden Wirkung sowohl bez\u00fcglich der Zellausbreitung als auch bez\u00fcglich der Matrixinvasion. Im Vergleich zum Medium ohne zugegebene N\u00e4hrstoffe wurde die Ausbreitung von Brustkrebszellen MDA-MB-231 in Gegenwart von A, P, L und 20\u00a0\u00b5g\/ml EGCG auf 74\u00a0% und von Dickdarmkrebszellen HCT116 auf 69\u00a0% verringert. Die Erh\u00f6hung der EGCG-Konzentration auf 50\u00a0\u00b5g\/ml brachte keine weitere Verringerung der Zahl der Brustkrebszellen. Jedoch wurde dadurch bei der Kontrollgruppe die Ausbreitung von Dickdarmkrebszellen auf 4,6\u00a0% und von Melanomzellen auf 30\u00a0% gesenkt. Die Matrigel-Invasion durch Brustkrebszellen und menschliche Melanomzellen in Gegenwart von AA, P, L und 20\u00a0\u00b5g\/ml EGCG wurde vollst\u00e4ndig gestoppt. Bei gleicher Konzentration wurde die Invasion durch Dickdarmkrebszellen auf 24,9\u00a0% reduziert. Wie die Gelatinase-Zymographie zeigt, wurde die Expression von Matrix-Metalloproteinasen (MMP)-2 und -9 durch diese N\u00e4hrstoffkombination in Melanomzellen allerdings nicht ver\u00e4ndert. MMP-2 und MMP-9 wurden durch EGCG dosisabh\u00e4ngig gehemmt; L, P und AA zeigten keine zus\u00e4tzliche Wirkung. Somit bietet die Kombination aus AA, P, L und EGCG ein gro\u00dfes Potenzial f\u00fcr die Kontrolle von Krebs durch ein sicheres und vielseitig wirksames Verfahren.<\/p>\n Einer der Hauptmechanismen, den Krebszellen verwenden, um sich im K\u00f6rper auszubreiten und Metastasen zu bilden, ist die enzymatische Zerst\u00f6rung des umliegenden Bindegewebes. Therapeutische Ma\u00dfnahmen zur Kontrolle dieses Prozesses durch spezielle Medikamente haben nicht zum Erfolg gef\u00fchrt und zurzeit gibt es kein Mittel, um die Metastasenbildung von Krebs zu kontrollieren. Aktuelle Behandlungsmethoden konzentrieren sich mit Chemotherapie und Strahlentherapie auf die Zerst\u00f6rung der Krebszellen im K\u00f6rper; sie richten sich nicht gegen die Metastasenbildung. Dar\u00fcber hinaus sind diese Behandlungen toxisch, nicht spezifisch und mit schweren Nebenwirkungen verbunden. Chemotherapie und Strahlentherapie bergen das Risiko der Entwicklung neuer Krebsarten und k\u00f6nnen durch die Zerst\u00f6rung des Bindegewebes im K\u00f6rper die Invasion von Krebs erleichtern. Aus diesem Grund werden sichere und wirksame Naturheilverfahren ben\u00f6tigt, die zur Kontrolle der Krebsausbreitung im K\u00f6rper eingesetzt werden k\u00f6nnen.<\/p>\n Um zu wachsen und sich in andere Bereiche des K\u00f6rpers auszubreiten, bauen die Krebszellen die extrazellul\u00e4re Matrix (ECM) durch verschiedene Matrix-Metalloproteinasen (MMP) und Plasmin ab, deren Aktivit\u00e4ten mit einem aggressiven Tumorwachstum einhergehen. Rath und Pauling (1992) postulierten, dass N\u00e4hrstoffe wie eine Aminos\u00e4ure, Lysin und Ascorbins\u00e4ure als nat\u00fcrliche Inhibitoren f\u00fcr die Proteolyse der extrazellul\u00e4ren Matrix fungieren k\u00f6nnen und das Potenzial besitzen, das Tumorwachstum und die Tumorausbreitung zu steuern. Diese N\u00e4hrstoffe k\u00f6nnen ihr Anti-Tumor-Potenzial durch verschiedene Mechanismen umsetzen, z.\u00a0B. durch die Hemmung von MMP und durch die St\u00e4rkung des Bindegewebes, das die Krebszellen umgibt (Einkapselung des Tumors).<\/p>\n Im Rahmen der vorliegenden Studie haben wir die Wirkung von Lysin, Ascorbins\u00e4ure und Prolin hinsichtlich ihres antiproliferativen und anti-invasiven Potenzials in verschiedenen menschlichen Krebszelllinien untersucht. Dar\u00fcber hinaus haben wir auch die Wirkung von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) mit der vorstehend beschriebenen Kombination erforscht. EGCG ist f\u00fcr seine Antikrebswirkung in verschiedenen Human- und experimentellen Studien bekannt (Mukhtar und Ahmed, 2000, Valcic, Timmerman et al., 1996). Es wurde auch postuliert, dass eine solche Kombination aus N\u00e4hrstoffen eine \u00e4u\u00dferst starke synergistische Wirkung aus\u00fcben w\u00fcrde.<\/p>\n Menschliche Brustkrebszellen MDA-MB-231, menschliche Dickdarmkrebszellen HCT116 und die menschliche Melanomzelllinie A2058 wurden von ATCC und normale menschliche Hautfibroblasten von Gibco bezogen. Wo keine speziellen Angaben gemacht werden, wurde das Kulturmedium von ATCC verwendet.<\/p>\n In den Untersuchungen zur Krebszellenausbreitung wurde jede Behandlung acht Mal wiederholt. Bei den Invasionsversuchen wurde jede Behandlung drei oder vier Mal wiederholt.<\/p>\n Bei diesen Untersuchungen wurden 5X 104<\/sup>-Brustkrebszellen in einem Liebovitz-Medium mit 10\u00a0% f\u00f6talem Rinderserum (FBS) in 24-Well-Platten gez\u00fcchtet. Das Medium wurde als solches (basal) oder mit bestimmten Zus\u00e4tzen verwendet. Die Platten wurden vier Tage in einem Umluftinkubator (ohne zus\u00e4tzliches CO2<\/sub>) inkubiert. Die Dickdarmkrebszellen HCT116 wurden in McCoy 5A-Medien gez\u00fcchtet und in einem Umluftinkubator mit 5% CO2<\/sub>\u00a0erhalten. Am Ende der Inkubationszeit wurden die Medien entnommen und die Zellen in den Wells mit PBS gewaschen. Anschlie\u00dfend folgte eine dreist\u00fcndige Inkubation mit MTT-F\u00e4rbung. Jedem Well wurde Dimethylsulfoxid (DMSO, 1\u00a0ml) zugegeben. Die Platten mit DMSO wurden unter vorsichtigem R\u00fchren 15\u00a0Minuten lang Zimmertemperatur ausgesetzt. Danach wurde die OD der L\u00f6sung in jedem Well bei 550\u00a0nm gemessen. Die OD550<\/sub>\u00a0der DMSO-L\u00f6sung im Well wurde als direkt proportional zur Zahl der Zellen betrachtet. Die OD550<\/sub>\u00a0der Behandlung, die keine Zus\u00e4tze enthielt (basal), wurde mit 100 angesetzt.<\/p>\n Die Untersuchungen wurden unter Verwendung von Matrigel-Eins\u00e4tzen (Becton Dickinson) in kompatiblen 24-Well-Platten durchgef\u00fchrt. Fibroblasten wurden in den Wells der Platte mit DMEM ges\u00e4t und gez\u00fcchtet. Als die Fibroblasten Konfluenz erreicht hatten, wurde das Medium entnommen und durch 750\u00a0\u00b5l der f\u00fcr die Behandlung bestimmten Medien ersetzt. Die Krebszellen (5X 104<\/sup>), die in 250\u00a0\u00b5l des Mediums, das mit N\u00e4hrstoffen entsprechend dem Aufbau des Experiments angereichert war, suspendiert worden waren, wurden auf den Einsatz im Well ges\u00e4t. Somit enthielt das Medium sowohl auf dem Einsatz als auch im Well die gleichen Zus\u00e4tze. Die Platten mit den Eins\u00e4tzen wurden anschlie\u00dfend 18-20\u00a0Stunden inkubiert (die MDA-MB-231-Zellen in einem Umluftinkubator und die Dickdarmkrebszellen und Melanomzellen in einem 5\u00a0% CO2<\/sub>-Inkubator). Nach der Inkubation wurden die Medien aus den Wells genommen. Die Zellen auf dem oberen Bereich der Eins\u00e4tze wurden vorsichtig mit einem Baumwolltupfer abgewischt. Die Zellen, die in die Matrigel-Membran eingedrungen und in den unteren Matrigel-Bereich gewandert waren, wurden mit Hemacolor (EM Sciences) gef\u00e4rbt und visuell unter dem Mikroskop gez\u00e4hlt. Die Ergebnisse wurden einer ANOVA unterzogen und alle m\u00f6glichen Paare wurde hinsichtlich ihrer Signifikanz bei p<0,05 getestet.<\/p>\n Die Medien in den verschiedenen Untersuchungen wurden mit Ascorbins\u00e4ure, Prolin, Lysin und EGCG in den Konzentrationen, die unter “Ergebnisse und Diskussion” angegeben sind, angereichert.<\/p>\n Die Gelatinase-Zymographie erfolgte in 10\u00a0% vorgefertigtem Novex-Polyacrylamidgel (Invitrogen) in Gegenwart von 0,1\u00a0% Gelatine. Das Kulturmedium (20\u00a0\u00b5l) wurde eingebracht und es wurde eine SDS-PAGE mit Tris-Glysin-SDS-Puffer durchgef\u00fchrt. Nach der Elektrophorese wurde das Gel 30\u00a0Minuten lang mit 5\u00a0% Triton X-100 gewaschen und gef\u00e4rbt. Gleichzeitig wurde anhand von Proteinstandards die ungef\u00e4hre Molek\u00fclmasse ermittelt.<\/p>\n In Abbildung 1 ist die Wirkung von 10, 20 und 50\u00a0\u00b5g\/ml EGCG ohne sowie mit der Zugabe von L, P und AA auf die Ausbreitung von Melanomzellen dargestellt. Weder L, P und AA noch EGCG hatten bei 10 und 20\u00a0\u00b5g\/ml eine signifikante Wirkung auf die Zellausbreitung. EGCG verringerte jedoch bei 50\u00a0\u00b5g\/ml die Zellzahl signifikant auf 30\u00a0%. Eine \u00e4hnliche Wirkung wurde bei der Zugabe von L, P und AA beobachtet.<\/p>\n Abbildung 1: Die Wirkung der Anreicherung von Basal mit 100 \u00b5M Ascorbins\u00e4ure (AA), 140 \u00b5M Prolin (P) und 400 \u00b5M Lysin (L) sowie mit verschiedenen Konzentrationen von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) auf die Zellausbreitung von Melanomzellen A2058.<\/p><\/div>\n Bei diesen Experimenten wurden dem basalen Medium 0, 10, 20, 50, 100 oder 200\u00a0\u00b5g\/ml EGCG (Abb. 2) zugegeben. Die Ergebnisse zeigen, dass die Anreicherung des basalen Mediums mit 50, 100 und 200\u00a0\u00b5g\/ml EGCG zu einer signifikanten Verringerung der Zellzahl auf 66,1 \u00b1 5,3, 33,6 \u00b1 2 bzw. 29,6 \u00b1 0,8\u00a0% im Vergleich zu den Kontrollobjekten ohne Zus\u00e4tze f\u00fchrte. Die EGCG-Konzentrationen im Zellmedium von bis zu 20\u00a0\u00b5g\/ml hatten keine signifikante hemmende Wirkung auf die Zellausbreitung.<\/p>\n Abbildung 2: Die Wirkung von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) auf die Zellausbreitung* von Brustkrebszellen MDA-MB-231.<\/p><\/div>\n Wir haben auch die Wirkung von AA, L und P sowie verschiedenen EGCG-Konzentrationen auf die Ausbreitung von Krebszellen untersucht. Abbildung 3 zeigt die nicht signifikante Verringerung der Zellzahl auf 86,1 + 1,93\u00a0% mit AA, L und P. Die Zugabe von 20, 50 und 100\u00a0\u00b5g EGCG zu dieser Kombination reduzierte die Zellzahl signifikant auf 74 \u00b1 5,8, 64,8 \u00b1 1,6 bzw. 22 \u00b1 5\u00a0% im Vergleich zur Kontrollgruppe.<\/p>\n Abbildung 3 : Die Wirkung der Anreicherung von Basal mit 100 \u00b5M Ascorbins\u00e4ure (AA), 140 \u00b5M Prolin (P) und 400 \u00b5M Lysin (L) sowie mit verschiedenen Konzentrationen von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) auf die Zellausbreitung von Brustkrebszellen MDA-MB-231.<\/p><\/div>\n W\u00e4hrend die hemmende Wirkung von AA, P und L auf die Zellausbreitung von Dickdarmkrebszellen nicht ausgepr\u00e4gt war, verringerte die Kombination aus AA, P und L mit 20\u00a0\u00b5g\/ml EGCG die Zellzahl signifikant auf 69 \u00b1 0,5\u00a0% (Abb. 4). Eine h\u00f6here EGCG-Konzentration in dieser Kombination (50\u00a0\u00b5g\/ml) reduzierte die Zellzahl drastisch auf 4,6 \u00b1 0,3\u00a0%.<\/p>\n Abbildung 4: Die Wirkung der Anreicherung von Basal mit 100 \u00b5M Ascorbins\u00e4ure (AA), 140 \u00b5M Prolin (P) und 400 \u00b5M Lysin (L) sowie mit verschiedenen Konzentrationen von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) auf die Zellausbreitung von Dickdarmkrebszellen HCT116.<\/p><\/div>\n Die antiproliferative Aktivit\u00e4t der N\u00e4hrstoffkombinationen, die in diesen Untersuchungen verwendet wurden, variierte mit dem Typ der Krebszellen. Bei Brustkrebszellen hatte die Kombination aus AA, P und L mit EGCG eine gr\u00f6\u00dfere antiproliferative Wirkung als bei der Einzelanwendung dieser N\u00e4hrstoffe. Bei Melanom- und Dickdarmkrebszellen, die der Kombination aus AA, P und L ausgesetzt wurden, konnte keine Beeinflussung ihrer Ausbreitung beobachtet werden. Jedoch resultierte die Kombination dieser N\u00e4hrstoffe mit 20\u00a0\u00b5g\/ml EGCG in einer signifikanten Verringerung der Zahl der Dickdarmkrebszellen, allerdings nicht der Melanomzellen. Die Dickdarmkrebszellen reagierten empfindlicher als die Brustkrebs- und die Melanomkrebszellen auf die geringste Konzentration der Kombination aus AA, P, L und EGCG. Die Ausbreitung der Dickdarmkrebszellen wurde fast vollst\u00e4ndig reduziert (4,6\u00a0%), als AA, P und L mit 50\u00a0\u00b5g\/ml kombiniert wurden.<\/p>\n Die Wirkung von EGCG auf Melanomzellen mit Basal und mit den Zus\u00e4tzen AA, P und L auf die Expression von MMP ist in Abbildung 5 anhand der Gelatinase-Zymographie dargestellt. Die Melanomzellen zeigten zwei B\u00e4nder, die MMP-2 und MMP-9 entsprachen. Die Kombination aus AA, L und P hatte, verglichen mit dem Basal, keine Wirkung auf die Expression der MMP-B\u00e4nder. EGCG hemmte jedoch dosisabh\u00e4ngig die Expression sowohl von MMP-2 als auch von MMP-9. Die Intensit\u00e4t der B\u00e4nder f\u00fcr Basal und die Kombination aus AA, L und P war identisch.<\/p>\n Abbildung 5: Die Wirkung der Anreicherung von Basal mit 100 \u00b5M Ascorbins\u00e4ure (AA), 140 \u00b5M Prolin (P) und 400 \u00b5M Lysin (L) sowie mit verschiedenen Konzentrationen von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) auf die Expression von Matrix-Metalloproteinasen (MMP) durch Melanomzellen. 1. Marker, 2. Basal, 3. AA+P+L, 4. EGCG 10 \u00b5g\/ml, 5. AA+P+L+10 \u00b5g\/ml EGCG, 6. EGCG 20 \u00b5g\/ml, 7. AA+P+L+EGCG 20 \u00b5g\/ml, 8. EGCG 50 \u00b5g\/ml, 9. AA+P+L+EGCG 50 \u00b5g\/ml<\/p><\/div>\n Wir haben die hemmende Wirkung einer Kombination aus AA, P und L separat und zusammen mit EGCG-Konzentrationen auf die extrazellul\u00e4re Matrix unter Verwendung vorgeformter Matrigel-Matrizen, die routinem\u00e4\u00dfig zur Bestimmung des invasiven Potenzials verschiedener Krebszelllinien eingesetzt werden, untersucht.<\/p>\n In Abbildung 6 sind die Ergebnisse der Matrigel-Invasion von Brustkrebszellen, die in Gegenwart von AA, P und L inkubiert wurden, dargestellt. Die Invasion von Krebszellen, die in einer Kombination aus AA, P und L inkubiert wurden, wurde im Vergleich zu den Zellen, die in einem Medium ohne Zus\u00e4tze inkubiert wurden, um 48,1 \u00b1 22,1\u00a0% verringert. In den Medien, die nur mit 20\u00a0\u00b5g\/ml EGCG angereichert waren, sank die Zahl der eindringenden Zellen auf 69,5 \u00b1 27,4\u00a0%. Die vollst\u00e4ndige Hemmung der Matrixinvasion durch Brustkrebszellen wurde in Gegenwart h\u00f6herer EGCG-Konzentrationen (50\u00a0\u00b5g\/ml und 100\u00a0\u00b5g\/ml) erreicht.<\/p>\n Abbildung 6: Die Wirkung der Anreicherung von Basal mit 100 \u00b5M Ascorbins\u00e4ure (AA), 140 \u00b5M Prolin (P) und 400 \u00b5M Lysin (L) sowie mit verschiedenen Konzentrationen von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) auf die Matrigel-Invasion durch Brustkrebszellen MDA-MB-231.<\/p><\/div>\n Abbildung 6 zeigt dar\u00fcber hinaus, dass die Kombination aus AA, P und L sowie 20\u00a0\u00b5g\/ml EGCG die Invasion von Krebszellen durch die extrazellul\u00e4re Matrix vollst\u00e4ndig gestoppt hat. Diese Kombination machte es m\u00f6glich, die maximale hemmende Wirkung auf die Krebszelleninvasion zu erzielen, ohne dass dadurch einzelne N\u00e4hrstoffe in hoher Konzentration ben\u00f6tigt wurden. Zusammen mit EGCG stoppten AA, P und L die Invasion von Brustkrebszellen vollst\u00e4ndig bei einer geringeren EGCG-Konzentration (20\u00a0\u00b5g\/ml).<\/p>\n Abbildung 7 zeigt, dass die Kombination aus AA, P und L die Invasion von Dickdarmkrebszellen signifikant auf 67,2 \u00b1 3,7\u00a0% reduzierte. Der alleinige Einsatz von EGCG in einer Konzentration von 20\u00a0\u00b5g\/ml senkte die Invasion auf 44,9 \u00b1 3,3\u00a0%, w\u00e4hrend die Kombination aus AA, P und L sowie 20\u00a0\u00b5g\/ml EGCG einen synergistischen Effekt hatte und die Invasion der Dickdarmkrebszellen auf 24,9 \u00b1 4,6% verringerte.<\/p>\n Abbildung 7: Die Wirkung der Anreicherung von Basal mit 100 \u00b5M Ascorbins\u00e4ure (AA), 140 \u00b5M Prolin (P) und 400 \u00b5M Lysin (L) sowie mit verschiedenen Konzentrationen von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) auf die Matrigel-Invasion durch Dickdarmkrebszellen HCT116.<\/p><\/div>\n Abbildung 8 zeigt, dass die Kombination aus AA, P und L die Zahl der eindringenden Zellen auf 88,2 \u00b1 4% reduzierte. Diese Verringerung war jedoch nicht statistisch signifikant. Die Kombination dieser N\u00e4hrstoffe mit nur 20\u00a0\u00b5g\/ml EGCG f\u00fchrte zu einer wirksamen Senkung der Zahl der eindringenden Zellen auf Null.<\/p>\n Abbildung 8: Die Wirkung der Anreicherung von Basal mit 100 \u00b5M Ascorbins\u00e4ure (AA), 140 \u00b5M Prolin (P) und 400 \u00b5M Lysin (L) sowie mit verschiedenen Konzentrationen von Epigallocatechin-Gallat (EGCG) auf Matrigel.<\/p><\/div>\n Diese Ergebnisse zeigen, dass wir durch die Verwendung von AA, P und L mit EGCG eine drastische Reduzierung der Zahl der Zellen erreichen konnten, die bei niedrigeren EGCG-Konzentrationen durch die Matrigel-Membran eindrangen und migrierten. Die Invasion wurde bei Brustkrebszellen und Melanomzellen mit einer geringen EGCG-Konzentration von 20\u00a0\u00b5g\/ml und einer Kombination aus AA, P und L auf Null verringert. Die Vorteile der Kombinationsergebnisse waren bei Dickdarmkrebszellen nicht so spektakul\u00e4r wie bei Brustkrebszellen. Die EGCG-Konzentration musste auf 50\u00a0\u00b5g\/ml erh\u00f6ht werden, um eine 90\u00a0%-ige Reduzierung der Invasion durch diese Zellen zu erzielen. Im Rahmen der vorliegenden Studie haben wir keine Ver\u00e4nderung der MMP-Expression bei Melamonzellen beobachtet, obwohl EGCG dosisabh\u00e4ngig eine hemmende Wirkung auf ihre Expression hat.<\/p>\n Ziel dieser Studie war es, die N\u00e4hrstoffkombination mit der effektivsten antiproliferativen und anti-invasiven Wirkung auf Krebszellen zu ermitteln. Die Untersuchung der molekularen Mechanismen muss in einem zweiten Schritt erfolgen. Wir k\u00f6nnen hier mehrere Mechanismen postulieren, anhand derer die hemmende Wirkung der beteiligten N\u00e4hrstoffe untersucht werden kann.<\/p>\n Die MMP-Aktivit\u00e4t l\u00e4sst sich mit Lysin durch plasmininduzierte Mechanismen beeinflussen, obschon andere Mechanismen nicht ausgeschlossen werden. Die MMP werden als Proenzyme ausgeschieden. Ihre Aktivierung wird teilweise durch Plasmin bedingt und ihre Vollendung erfordert eine aktive Form von MMP-3. Der Aktivierungsmechanismus verschiedener MMP, der von Nagase beschrieben wird (1997), weist darauf hin, dass f\u00fcr MMP-3 ebenfalls die Umwandlung von Plasminogen in seine aktive Form Plasmin erforderlich ist. Das aktive Bindungszentrum von Plasminogen besitzt die Stellen, an denen sich Lysin vor allem anh\u00e4ngt. Aus diesem Grund kann Lysin die Aktivierung von Plasminogen in Plasmin durch den Plasminogenaktivator (Rath und Pauling, 1992) st\u00f6ren, indem es sich an plasminogenaktive Stellen heftet. Tranexams\u00e4ure, ein synthetischer Lysin-Analogstoff, wurde verwendet, um die plasmininduzierte Proteolyse durch diesen Mechanismus zu hemmen.<\/p>\n Da die Plasminaktivit\u00e4t von wesentlicher Bedeutung f\u00fcr die Induzierung verschiedener Gewebe-MMP ist, kann Lysin die Umwandlung von Plasminogen in Plasmin st\u00f6ren und dadurch die Aktivierung fast s\u00e4mtlicher MMP verhindern. Dar\u00fcber hinaus hat sich gezeigt, dass EGCG durch die Inhibition von MMP-2 eine hemmende Wirkung auf den Abbau der extrazellul\u00e4ren Matrix hat (Demeule et al., 2000).<\/p>\n Es ist auch m\u00f6glich, die Invasion der Zellmatrix zu beeinflussen, indem man die Stabilit\u00e4t und die St\u00e4rke des Bindegewebes, das die Krebszellen umgibt, erh\u00f6ht und die “Einkapselung” des Tumors f\u00f6rdert. Dies erfordert die Optimierung der Synthese und der Struktur der Kollagenfibrillen, f\u00fcr die die Hydroxylierung von Hydroxyprolin- und Hydroxylysinresten in den Kollagenfibrillen von gr\u00f6\u00dfter Wichtigkeit ist. Es ist bekannt, dass Ascorbins\u00e4ure unerl\u00e4sslich f\u00fcr die Hydroxylierung dieser Aminos\u00e4uren ist. Ascorbins\u00e4ure und L-Lysin werden in der Regel nicht im menschlichen K\u00f6rper produziert. Daher sind suboptimale Konzentrationen dieser N\u00e4hrstoffe in verschiedenen pathologischen Stadien sowie durch eine unausgewogene Ern\u00e4hrung m\u00f6glich. Obwohl Prolin aus Arginin synthetisiert werden kann, werden seine Synthese und\/oder Hydroxylierung unter Umst\u00e4nden durch pathologische Zust\u00e4nde beeinflusst. Es hat sich gezeigt, dass der Hydroxyprolingehalt von metastatischem Tumorgewebe wesentlich geringer ist als in nicht metastatischem Tumorgewebe (Chubainskaia et al., 1989). Eine Vielzahl von Medikamenten, die die Metastasierung verringert haben, haben gleichzeitig den Hydroxyprolingehalt der Gewebe erh\u00f6ht (Chubainskaia et al., 1989). Die Hydroxyprolinkonzentration im Urin von Krebspatienten war h\u00f6her als bei gesunden Personen oder Patienten ohne Krebs (Okazaki et al., 1992). All diese Ergebnisse lassen eine nachteilige Wirkung von Krebszellen auf den Prolinmetabolismus sowie einen m\u00f6glichen konditionierten Prolinmangel bei Krebspatienten vermuten.<\/p>\n Bei Krebspatienten wurden geringere Ascorbins\u00e4urekonzentrationen festgestellt. (Anthony und Schorah, 1982, Nunez et al., 1995, Kurbacher et al., 1996). Ascorbins\u00e4ure ist \u00e4u\u00dferst zytotoxisch f\u00fcr b\u00f6sartige Zelllinien (Koh et al., 1998, Roomi et al., 1998) und wirkt antimetastatisch (Liu et al., 2000). Unsere Untersuchungen anhand der Kombination aus Ascorbins\u00e4ure, Prolin und Lysin haben ergeben, dass diese Kombination eine starke antiproliferative und antimetastatische Wirkung auf verschiedene Krebszelllinien in Gewebekulturstudien hat. Die Wirkung konnte jedoch die Ausbreitung und Metastatisierung nicht v\u00f6llig verhindern.<\/p>\n EGCG, eines der Catechine im Extrakt des gr\u00fcnes Tees, ist das st\u00e4rkste Antikrebsmittel (Valcic et al., 1996, Mukhtar und Ahmed, 2000). Es wirkt auf bestimmte menschliche Krebszelllinien wachstumshemmend. (Ahmad et al., 1997, Liang et al., 1997, Yang et al., 1998). Es besteht also eine Synergie in den Antikrebsaktivit\u00e4ten der Kombination aus AA, P und L einerseits und EGCG andererseits. Aus diesem Grund nahm man an, dass diese Kombination zusammen mit EGCG eine synergistische Antikrebsaktivit\u00e4t entwickeln w\u00fcrde.<\/p>\n Es steht fest, dass die Kombination aus AA, P und L mit EGCG das Potenzial besitzt, bei allen drei Krebsarten, die im Rahmen der vorliegenden Studie untersucht wurden, zu einer wesentlichen Verbesserung beizutragen. Bei Brustkrebs und Melanomen wird diese Verbesserung durch die drastische Verringerung der Zellmetastatisierung erreicht. Bei Dickdarmkrebs kann mit einer h\u00f6heren EGCG-Konzentration eine erhebliche Reduzierung der Ausbreitung und der Metastatisierung erzielt werden.<\/p>\n Ahmad, N., Feyes, D.K., Nieminen, A.L., Agarwal, R. and Mukhtar, H. (1997). Green tea constituent epigallocatechin-3-gallate and induction of apoptosis and cell cycle arrest in human carcinoma cells J.Natil. Cancer Inst. 89: 1991-1886.<\/p>\n Anthony, H.M. and Schorah, C.J. 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(1996) Ascorbic acid (vitamin C) improves the antineoplastic activity of doxorubicin, cisplatin and paclitaxel in human breast carcinoma cells in vitro. Cancer. Lett. 103: 183-189<\/p>\n Liang, Y.C., Lin-shiau, S.Y., Chen. C.F. and Lin, K.J. (1997) Suppression of extracellular signals and cell proliferation through EGF receptor binding (-) epigallocatichin gallate in human A43 epidermal carcinoma cells. J. Cell. Bioechem 67: 55-65.<\/p>\n Liu, J.W., Nagao, N., Kageyama, K. and Miwa, N. (2000) Anti-metastatic effect of an antooxidation-resistant and lipophilic ascorbic acid derivative through inhibition of tumor invasion. Anticancer. Res. 20: 113-118.<\/p>\n Muktar, H. And Ahmed, N. (2000). Tea polyphenols: prevention of cancer and optimising health. Am. J. Clin. Nutr. 71: 1698S-1720S.<\/p>\n Nagase, H. (1997). Activation mechanisms of matrix metalloproteinases. Bio Chem. 378:51-160.<\/p>\n Nunez, M.C., Ortiz de Apodaca, Y. and Ruiz, A. (1995). Ascorbic acid in the plasma and blood cells of women with breast cancer. The effect of consumption of food with an elevated content of this vitamin. Nutr. Hosp. 10; 368-37<\/p>\n Okazaki, I., Matsuyama, S., Suzuki, F., Maruta, A., Kubochi, K., Yoshino, K., Kobayashi, Y., Abe, O. and Tsuchiya, M. (1992). Endogenous urinary 3-hydroxyproline has 96% specificity and 44% sensitivity for cancer screening. Lab. Clin. Med. 120: 828-830.<\/p>\n Roomi, M.W., House, D., Eckert-Macksic, M., Maksic, Z.B. and Tsao, S.C. (1998). Growth, suppression of malignant leukaemia cell line in vitro by ascorbic acid (vitamin C) and its derivatives. Cancer. Letters.122: 93-99.<\/p>\n Rath, M. and Pauling, L. (1992) Plamin induced proteolysis and role of apoprotein(a), lysine and synthetic lysine analogs. J. Orthomolecular. Medicine. 7:17-23.<\/p>\n Valcic, S., Timmermann, B.N., Alberts, D.S., Wachter, G.A., Krutzsch, M., Wymer, J. and Guillen, M. (1996), Inhibitory effects of six green tea-catechins and caffeine on the growth of four selected human tumor cell lines. Anticancer Drugs 7: 461-468.<\/p>\n Yang, G.Y., Liao, J., Kim, K., Yurkow, E.J. and Yang, C.S. (1998) Inhbition of growth and induction of apoptosis in human cancer cell lines by tea polyphenols. Carcinogenesis.19: 611-616<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" Shrirang P Netke, M Waheed Roomi, Vadim Ivanov, Aleksandra Niedzwiecki*\u00a0und Matthias Rath Emerging Drugs, Vol. II. 2003, 37-50 Matthias Rath, Inc., Research and Development, Santa Clara, [\u2026]<\/span><\/p>\n","protected":false},"author":2,"featured_media":28498,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[417],"tags":[393],"yoast_head":"\n
\n* Autor f\u00fcr Korrespondenz und Nachdrucke. Telefon: (408) 807-5564, Fax: (408) 986-9403<\/em><\/p>\nZusammenfassung<\/h3>\n
Einleitung<\/h3>\n
Materialien und Methoden<\/h3>\n
Untersuchung der Zellausbreitung<\/h4>\n
Untersuchung der Matrigel-Invasion<\/h4>\n
Gelatinase Zymographie<\/h4>\n
Ergebnisse und Diskussion<\/h3>\n
(A) Untersuchung der Krebszellenausbreitung<\/em><\/h2>\n
Melanomzellen A2058<\/h4>\n
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Brustkrebszellen MDA-MB-231<\/h4>\n
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(B)\u00a0Gelatinase-Zymographie<\/em><\/h2>\n
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(C )\u00a0Untersuchung der Invasion der extrazellul\u00e4ren Matrix und der Migration<\/em><\/h2>\n
Brustkrebszellen MDA-MB-231<\/strong><\/h4>\n
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Dickdarmkrebszellen HCT116<\/h4>\n
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Melanomzellen A2085<\/h4>\n
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Literaturverzeichnis<\/strong><\/h3>\n